如何延长UPLC柱寿命

关于流动相

• 选择优质的色谱级流动相溶剂；
• 确保使用超纯水，纯化水系统应始终处于良好的工作状态；
• 通道中避免使用100%水相，如含有5-10%有机相就可显著抑菌； 如果必须使用100%水相，则每24-48小时必须新鲜配制、* 更换(含溶剂瓶)；
• 对流动相水溶液部分使用0.2 µm过滤膜过滤(推荐使用：沃特世P/N:186003524 0.2 µm 47 mm GHP膜)。

关于样品制备

• 样品溶液中的微粒会堵塞系统管路或色谱柱，可使用高速离心

和/或用0.2 µm过滤膜过滤样品，确保滤膜与样品溶液兼容(推荐使用：沃特世 P/N: WAT097962，针式过滤膜GHP；或垂询我们)；

• 确保样品与流动相体系兼容，进样后不会发生沉淀；
• 较脏的样品，容易造成色谱柱污染，使用适合的固相萃取小柱对样品进行净化处理。

清洗与再生

亲水作用色谱柱操作建议

(CORTECS HILIC、BEH HILIC、BEH Amide)

亲水作用色谱柱的使用方法与反相色谱柱有很大的不同，需要加以

注意。(关于HILIC，请访问waters.con/hilic，并参考《HILIC   综合指南》，715002531ZH)。

样品制备

• 应尽可能使用较高比例的有机溶剂(如95%乙腈)，以避免溶剂效应。如果存在样品溶解问题，应至少使用50/50乙腈/水，并减少进样体积。

柱平衡

• 初次使用时，先用50倍柱体积的50/50乙腈/水(CORTECS HILIC， BEH HILIC，如果流动相条件含有缓冲盐则需添加10 mM流动相缓冲盐)或60/40乙腈/水(BEH Amide)对柱进行老化；
• 开始进样前，用20倍柱体积的起始流动相条件进行平衡；
• 如果使用梯度条件，每次梯度之间，用8-10倍柱体积的起始流动相条件再次平衡。
• 没有充分老化平衡的色谱柱，将会出现柱效较低、以及保留时间漂移的问题。

柱清洗再生

• 对于ACQUITY UPLC BEH HILIC与CORTECS HILIC色谱柱，用

50/50乙腈/水清洗以去除极性污染物。如果不能解决问题，用5/95

的乙腈/水冲洗；

• 对于ACQUITY UPLC Amide色谱柱，可采用10分钟的梯度洗脱从100%有机相到100%水相。值得注意的是当水相比例升高，压力将迅速增加，当水相比例超过60%时需降低流速。如果有必要可重复清洗。

柱保存

• 先将缓冲盐从色谱柱内冲洗干净，然后将色谱柱保存在95/5乙腈/水(BEH HILIC，CORTECS HILIC)或100%乙腈(BEH Amide)中。

过滤膜

沃特世建议您使用0.2 µm的过滤膜对缓冲溶液和样品进行过滤， 以避免颗粒物质堵塞色谱柱和仪器部件。

UPLC柱配件

UPLC柱的连接

ACQUITY UPLC系统使用专门设计的可耐受高压并且有

小柱外体积的管路和接头。*的色谱柱进口管路(订货号430001084)是随ACQUITY     UPLC色谱系统配的，进样阀末端的管路清晰地用蓝色标记标示出来，将这根管路的另一端插入UPLC色谱柱的入口端并用5/16英寸的扳手拧紧。关于ACQUITY   UPLC色谱柱正确的出口管路，请参考ACQUITY UPLC系统操作手册的相关检测器部分(订货号71500082502)。