Thermo 离子交换色谱柱使用和维护说明
发布日期:2020-01-09 浏览次数:5735
为了使您的色谱柱能发挥大的性能,敬请先阅读以下说明:
1、 适用类型
Thermo 离子交换色谱柱包括:BioBasic AX,SCX,Hypersil SAX,Hypersil Gold AX, SAX 等。
2、 柱体积
色谱柱的柱体积可以通过以下公式估算:
V = 0.68 πr2L
V 为色谱柱柱体积(mL),r 为色谱柱内径(cm),L 为色谱柱长度(cm)。
3、 色谱柱柱效测试与保存
离子交换色谱柱出厂时都经过柱效测试,请参考柱效报告。
在条件允许情况下,请对新色谱柱进行柱效测试。
离子交换色谱柱出厂时均保存在乙醇溶液中(如有不同,以柱效报告为准)。
4、 温度
所有硅胶基质色谱柱使用温度应低于 60℃。
5、 样品
建议将样品溶解在流动相或极性相近的溶剂中。如果使用梯度洗脱,则需要将样品溶解在初始流动相或极性相近的溶剂中。样品溶液不应含有任何颗粒物,建议使用 0.5μm 或更小粒径的滤膜过滤。同时建议在色谱系统中使用在线过滤器。
6、 流动相
所用溶剂通常为水、乙腈、甲醇等,Thermo 的离子交换色谱柱可以 100%水为流动相, 进行盐的梯度洗脱。流动相中含有机相时,请注意降低盐的浓度,以防止溶剂混合后盐从流动相中析出。更换流动相时也要注意这一问题,可先用含较高纯水的流动相除盐过渡。请将流动相的 pH 值控制在 2-8。缓冲盐浓度在 500 mM 以下。所有流动相,建议当日实验当日配制,并使用 2μm 滤膜过滤。
7、 色谱柱安装
请小心操作色谱柱。
不要摔、碰色谱柱,这样会损坏色谱柱床,使色谱柱性能下降。使用合适的连接管路和接头,确保色谱柱连接处死体积降到低(使用不锈钢接头时需要尤其注意)。我们建议使用 SLIPFREE 接头,此接头与 Thermo 色谱柱以及其他品牌色谱柱均完美匹配。
8、 色谱柱平衡
新柱在使用前,请预先用 20 倍柱体积甲醇/或乙腈冲洗色谱柱,然后以初始流动相(不含盐)冲洗 10 倍柱体积。在进行正式分析之前,请使用至少 20 倍柱体积的流动相冲洗色谱柱,以使色谱柱达到平衡。
9、 色谱柱保护
对于成分复杂的“脏”样品以及组分未知的样品,请尽量使用在线滤器或保护柱,如果可能,使用 SPE 小柱对样品进行前处理是更好的选择。上述做法可以有效延长色谱柱使用寿命。
10、 色谱柱清洗
常规清洗:每天完成分析之后,用 100% 水冲洗 30 倍柱体积除盐,然后用 20% 甲醇/或乙腈冲洗 20 个柱体积,保存在 20% 甲醇/或乙腈中。
清洗强保留污染物:如果发现离子交换色谱柱柱效出现大幅下降,可通过如下方法
清洗离子交换色谱柱:首先用高浓度的缓冲盐溶液清洗(浓度是流动相的 5-10 倍,但不得超过 1M),冲洗 30倍柱体积。用 100% 水冲洗 20 倍柱体积以除盐后,再用 100%甲醇/或乙腈清洗 30 倍柱体积。后用 20%甲醇/或乙腈水溶液(不含盐)保存。
11、 色谱柱保存
用 100% 水冲洗 30 倍柱体积除盐后,若短期不使用(<1 周),用 20% 甲醇或乙腈冲洗 20 倍柱体积后,保存在 20% 甲醇/或乙腈中;若需长期放置(>1周),用 50% 甲醇/或乙腈冲洗 20 倍柱体积后,保存在 50% 甲醇/或乙腈中。